TP Cytosquelette et Adhérence : Etude par Microscopie à Epifluorescence

Grâce à ces marquages nous pourrons dans une dernière partie étudier le cytosquelette d'actines et les adhérences focales.

Nous allons tout d'abord provoquer le décollement de nos cellules de leurs supports puis grâce à ce décollement nous allons effectuer un comptage cellulaire par utilisation de plaque compte-cellule (une plaque de Malassez). Après avoir vérifié que nous avons un nombre correct de cellules, nous effectuerons l'ensemencement de nos cellules sur les lamelles micropatternées CYTOO que nous incuberons.

Dans une deuxième partie, nous fixerons des structures d'adhérences afin de pouvoir révéler au microscope des parties ciblées de notre cellule. Dans un premier temps nous ajouterons de la phalloïdine couplée à un fluorochrome rouge (TRITC) qui nous révèlera au microscope à epifluorescence l'actine avec un filtre qui apparaît rouge. Puis dans un second temps, nous déposerons une goutte de liquide de montage qui nous révèlera au microscope le noyau avec un filtre qui apparaîtra bleu.

III)Résultats et conclusion

Introduction

I)Matériels et méthodes

Rôles des constituants pour le comptage cellulaire:

1-Ensemencement des cellules sur micropatterns :

2-Fixation et révélation des structures d'adhérence et de l'architecture actinique des ostéoblastes :

3-Observation des marquages fluorescents en microscopie à épifluorescence.

II)Résultats

1) Observation de cellules fixées au microscope à contraste de phase, double inverse:

2) Observation de cellules décollées au microscope à contraste de phase, double inverse:

3) Numération cellulaire sur lame de Malassez:

4) Observation des cellules sur lamelles micropatternées:

5) Observation des cellules sur plaque CYTOO au microscope à épifluorescence: